A molekulatömege fehérjék és módszerek meghatározása e

A fehérjék nagy molekulatömegű vegyületek, amelyek több száz vagy akár több ezer aminosavak építeni a makromolekuláris szerkezetet. A molekulatömege fehérjék között mozgott 6000 (alsó határérték) az 1.000.000 és a magasabb számától függően egyedi polipeptid lánc, amely egy egyetlen molekuláris szerkezetét a fehérje. Ezek polipeptid lánc nevű alegységek. Az molekulatömegű széles skálán mozog - 6000 100000 és így tovább.

Különböző módszerek vannak meghatározására molekulatömegű fehérjék. Az első közülük alapultak kémiai elemek vagy azonosítására azok az aminosavak, tartalmazza a fehérje minimális mennyiségben. Egy példa egy ilyen módszer a meghatározása a molekulatömeg a hemoglobin-tartalom az ott vas. emlős hemoglobin tartalmaz 0,34 g vasat 100 g fehérje. Mivel a atomsúlya vas 56, majd 0,34 g 0,34 felel meg: 56 = 1: 165 g * ekv. Ezért a fehérje mennyisége 1 g * vas atomot (56 g) 165 * 100 = 16 500. Ez az érték képviseli a molekulatömeg-hemoglobin, már régóta tekintik a valódi molekulatömege a protein. Fizikai-kémiai módszerekkel így molekulatömegű hemoglobin oldatban 68 000, amely megfelel egy részecske, amely négy alegységből, amelynek molekulatömege, és az által meghatározott összeg a vas. Hasonlóképpen, a legkisebb molekulatömege a fehérje lehet kiszámítani aminosav-tartalma, amelyben a minimális számú fehérjék.

Egy másik módszer abban áll, mennyiségi meghatározására amino-terminális b. Például, ha az 1 gramm fehérje tartalmaz 0,025 * 10 c-3 mmól terminális a-amino-csoportok, a minimális relatív molekulatömege egyenlő 1: (0,025 * 10 c-3) = 40 000.

Amikor a fizikai-kémiai módszerekkel meghatározására molekulatömegű fehérjék fontos tudni, hogy az eredmény nem csak attól függ a tömeg, hanem az alakja és az elektromos töltés a fehérje molekulák, különösen akkor, ha a változó a diffúzió sebessége a fehérje, ülepedési sebességének egy gravitációs mezőben. Ebben az esetben, jó eredményeket kapunk csak molekulák amelynek alakja közel gömb alakú. A diffúzió sebessége és az ülepedési hosszúkás molekulák növekvő súrlódási együttható lényegesen csökken; tömény oldatokban a fehérjék ilyen molekulák vannak kitéve intenzívebb tengelykapcsolók. Alkalmazásakor dinamikus módszerek hatása hidratálásra részecskék növekedését okozza hatékony méretei a fehérjemolekulák és lelassíthatja a mozgást egy oldószerben. Ebben a tekintetben, a meghatározására molekulatömegű fehérjék előnyösen statikus módszer, amikor a fehérje oldat egyensúly van, például mérésével az ozmotikus nyomást, vagy a koncentrációgradiens a gravitációs mezőben ultracentrifuga. Hatásának kiküszöbölése érdekében az intermolekuláris erők meghatározó molekulatömegű fehérjék hajthatjuk végre különböző fehérje koncentrációjú, a későbbi extrapolálással végtelen hígítás mellett, azaz a a C = 0.

A pH, amelyen a fehérje szerez összesen nulla díj, az úgynevezett „izoelektromos pont”, és a továbbiakban, mint pl. A izoelektromos pontja számának pozitív és negatív töltésű csoportok azonos fehérjét, azaz a fehérje az izoelektromos állapotban.

Mivel a legtöbb fehérje a sejt összetételében az anionos csoportok (-COO -), izoelektromos pontja a fehérje a enyhén savas környezetben. A izoelektromos pontja a fehérjék a készítményben túlsúlyban kationos csoport lúgos közegben. A legtisztább példa ilyen intracelluláris proteinek tartalmaznak sok lizin és arginin, - hisztonok alkotó kromatin.

Fehérjék, amelynek nettó pozitív vagy negatív töltést, jobban oldódnak, mint a fehérjék található az izoelektromos pont. A teljes töltés növeli a víz dipólusok képesek kötődni a fehérjemolekula, és megakadályozza az érintkezést a hasonló töltésű molekulák, ami növeli a fehérjék oldhatósága. Töltött fehérjéktől mozoghat az elektromos mező: anionos fehérjék, amelyek egy negatív töltésű, fog mozogni, hogy a pozitív töltésű anód (+) és a kationos fehérjék - a negatív töltésű katód (-). Található fehérjéket izoelektromos állapotban, nem mozog az elektromos mezőt.

Izoelektromos állapotot nevezik az állam a fehérje molekula, amelyben a pozitív és negatív töltések kölcsönösen kompenzálják. fehérje molekula izoelektromos állapotban lehet tekinteni, mint semleges, annak ellenére, hogy tartalmaz ionizált csoportokat.

Protamin - pozitív töltésű nukleáris fehérjék molekulatömege 10-12kDa, körülbelül 80% állnak bázikus aminosavak, ami számukra a képességét, hogy kölcsönhatásba lépnek a nukleinsav aminosavak keresztül ionos kötésekkel. A izoelektromos pontja a vizes oldatok a lúgos közegben.

Globulinok - vérglobulin gyengén oldódnak vízben, és molekulatömege körülbelül 150 kDa. A izoelektromos pontja a vizes oldatok savas környezetben.